摘 要：維生素a為一種重要的脂溶性物質(zhì)，現(xiàn)階段對(duì)該物質(zhì)的含量測(cè)定方法主要有：薄層色譜法、分光光度法、液相色譜法、氣相色譜法等，高效液相色譜法為一種操作簡單、快速、靈敏、準(zhǔn)確的測(cè)定維生素a的方法，本文從樣品處理、色譜分離以及檢測(cè)等幾個(gè)方面對(duì)高效液相色譜色譜法測(cè)定牛奶及乳制品中維生素a的研究進(jìn)行綜述。
關(guān)鍵詞：維生素a；高效液相色譜法；脂溶性
中圖分類號(hào)：q493.6 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：a
維生素a屬于一種重要的食品營養(yǎng)添加劑，在各類食品中尤其是乳制品中均有添加維生素a，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)全球性的兒童維生素a缺乏這一嚴(yán)重的營養(yǎng)缺乏問題予以了有效的應(yīng)對(duì)，出于對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行控制的目的，降低由于添加不合理而給健康帶來的危害，因此應(yīng)對(duì)產(chǎn)品中維生素a的質(zhì)量展開準(zhǔn)確的測(cè)定。本文對(duì)高效液相色譜色譜法測(cè)定牛奶及乳制品中維生素a的研究情況進(jìn)行具體闡述，詳見下文。
1 維生素a高效液相色譜測(cè)定
1.1 樣品制備
近幾年以來高效液相色譜法在奶粉、牛奶等乳制品中維生素a檢測(cè)過程中得到了廣泛的應(yīng)用。然而在檢測(cè)過程中樣品處理為關(guān)鍵環(huán)節(jié)，現(xiàn)階段乳制品樣品處理過程主要涉及到以下幾個(gè)方面：① 溶解均化。即對(duì)樣品進(jìn)行充分溶解，混合均勻，以便更加完全的進(jìn)行萃取。② 蛋白質(zhì)沉淀。由于樣品中混有蛋白質(zhì)會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生一定程度的影響，因此應(yīng)采取極性有機(jī)溶液降低蛋白質(zhì)的溶解性，使其產(chǎn)生沉淀而達(dá)到分離的效果。常用的溶劑包括有丙酮、乙腈、甲醇以及乙醇等，溶劑的用量視具體情況而定，但是值得注意的是應(yīng)盡量避免采取酸溶液。③ 維生素a的分離。在生乳中維生素a的存在形式為酯化，在乳脂肪中分布，因此在分離過程中多數(shù)會(huì)選擇皂化處理，不但能夠促進(jìn)維生素a與脂肪發(fā)生脫離，而且能夠?qū)⒕S生素a的酯轉(zhuǎn)變成視黃醇。曾有研究指出，在對(duì)樣品處理過程中可以采用脂肪酶處理，能夠?qū)υ砘幚碛枰蕴娲?，將酯轉(zhuǎn)化成視黃醇。④ 維生素a的萃取?，F(xiàn)階段常用的萃取方法主要包括有：液液萃取、加壓溶劑萃取、固相萃取、超臨界流體萃取等。
1.2 色譜分離
高效液相色譜法具有分離和定量分析功能，為檢測(cè)乳制品中維生素a含量的一種常用手段，高效液相色譜分正相色譜和反相色譜兩種形式。
1.2.1 正相色譜
對(duì)于正相色譜而言其固定性為極性物質(zhì)，常用的有硅膠或經(jīng)極性基團(tuán)改性的硅膠，而洗脫液則是采用非極性溶劑，譬如說正己烷等，在進(jìn)行洗脫的過程中，也可在洗脫液中加入少量的極性調(diào)節(jié)溶液，譬如說異丙醇或者是氯仿等。研究證實(shí)正相色譜對(duì)流動(dòng)相的變化具有較高的敏感性，因此采取梯度洗脫時(shí)耗時(shí)較長，此為正相色譜的不足之處，因此在乳制品檢測(cè)中比較少用。
1.2.2 反相色譜
反相色譜是利用在流動(dòng)相與和極性洗脫液之間待分離物質(zhì)的相分配實(shí)現(xiàn)的。一般情況下反相色譜的固定相為c18或c8，而洗脫液則是采取極性溶劑，譬如說水、甲醇、乙腈等，也可以是幾種溶劑的混合溶劑。大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)，反相色譜的穩(wěn)定性較正相色譜高，因此在含量測(cè)定等方面的應(yīng)用更加廣泛。現(xiàn)階段對(duì)于乳制品中維生素a的測(cè)定基本均采取反相色譜法。
1.3 檢測(cè)
在維生素a經(jīng)過色譜柱進(jìn)行分離后需要接受定量檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)，現(xiàn)階段較為常用的檢測(cè)器包括有紫外檢測(cè)儀、二極管陣列、用電化學(xué)法、熒光檢測(cè)儀、質(zhì)譜檢測(cè)等。對(duì)于紫外檢測(cè)而言，由于維生素a中存在多個(gè)共軛體系，因此能夠?qū)?00nm-400nm范圍內(nèi)的紫外光產(chǎn)生較強(qiáng)吸收，一般情況吸收波長在325nm左右，現(xiàn)階段在分析過程中紫外檢測(cè)器的應(yīng)用最為廣泛，然近階段有研究顯示，二極管陣列的應(yīng)用率正在逐漸增加，因其能夠更加準(zhǔn)確的對(duì)檢測(cè)物質(zhì)進(jìn)行定性，并且可同時(shí)檢測(cè)多種物質(zhì)。
1.4 定性與定量
現(xiàn)階段常用的定量法為內(nèi)標(biāo)法，其能夠有效提高準(zhǔn)確度與精度，然在檢測(cè)維生素a時(shí)具有應(yīng)用價(jià)值的內(nèi)標(biāo)物相對(duì)較少，所以一般較少應(yīng)用，并且現(xiàn)階段市面上的維生素a的標(biāo)準(zhǔn)樣純度較高，并且色譜儀器的精密度也十分理想，因此外標(biāo)法能夠?qū)Ψ治鲆笥枰猿浞值臐M足，在維生素a檢測(cè)中多數(shù)采取外標(biāo)法進(jìn)行定量。
2 存在的問題
由于經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，科技水平不斷提高，使得分析儀器以及分析方法不斷進(jìn)行改進(jìn)，近幾年分析水平得到了很大程度的提高，對(duì)乳制品中維生素a含量的檢測(cè)技術(shù)也已經(jīng)日趨成熟。然而依舊存在一些需要進(jìn)一步解決的問題，在諸多問題中，最為顯著的便是對(duì)維生素a的各種異構(gòu)體進(jìn)行檢測(cè)，盡管曾有相關(guān)的實(shí)驗(yàn)嘗試對(duì)各種異構(gòu)體的檢測(cè)進(jìn)行合理解決，然而還不夠成熟。經(jīng)分析研究得知，主要存在以下兩種障礙：對(duì)各種異構(gòu)體的標(biāo)準(zhǔn)樣品比較缺乏；樣品中各種異構(gòu)體純度不夠，并且會(huì)在短時(shí)間內(nèi)發(fā)生相互轉(zhuǎn)化，穩(wěn)定性較差含量測(cè)定無法得到準(zhǔn)確結(jié)果。
結(jié)語
綜上所述，現(xiàn)階段對(duì)于乳制品中維生素a的檢測(cè)主要依賴高效液相色譜法，且多數(shù)采用反相色譜法，在檢測(cè)過程中應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行，做好樣品處理工作，對(duì)檢測(cè)器、流動(dòng)相、固定相以及定量分析方法等進(jìn)行合理的選擇，從而保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。并應(yīng)繼續(xù)展開維生素a異構(gòu)體檢測(cè)的研究，使分析方法能夠得到完善，更好的為改善乳制品質(zhì)量水平提供保障。
