摘 要：維生素a為一種重要的脂溶性物質，現階段對該物質的含量測定方法主要有：薄層色譜法、分光光度法、液相色譜法、氣相色譜法等，高效液相色譜法為一種操作簡單、快速、靈敏、準確的測定維生素a的方法，本文從樣品處理、色譜分離以及檢測等幾個方面對高效液相色譜色譜法測定牛奶及乳制品中維生素a的研究進行綜述。
關鍵詞：維生素a；高效液相色譜法；脂溶性
中圖分類號：q493.6 文獻標識碼：a
維生素a屬于一種重要的食品營養添加劑，在各類食品中尤其是乳制品中均有添加維生素a，從而實現對全球性的兒童維生素a缺乏這一嚴重的營養缺乏問題予以了有效的應對，出于對產品質量進行控制的目的，降低由于添加不合理而給健康帶來的危害，因此應對產品中維生素a的質量展開準確的測定。本文對高效液相色譜色譜法測定牛奶及乳制品中維生素a的研究情況進行具體闡述，詳見下文。
1 維生素a高效液相色譜測定
1.1 樣品制備
近幾年以來高效液相色譜法在奶粉、牛奶等乳制品中維生素a檢測過程中得到了廣泛的應用。然而在檢測過程中樣品處理為關鍵環節，現階段乳制品樣品處理過程主要涉及到以下幾個方面：① 溶解均化。即對樣品進行充分溶解，混合均勻，以便更加完全的進行萃取。② 蛋白質沉淀。由于樣品中混有蛋白質會對檢測結果產生一定程度的影響，因此應采取極性有機溶液降低蛋白質的溶解性，使其產生沉淀而達到分離的效果。常用的溶劑包括有丙酮、乙腈、甲醇以及乙醇等，溶劑的用量視具體情況而定，但是值得注意的是應盡量避免采取酸溶液。③ 維生素a的分離。在生乳中維生素a的存在形式為酯化，在乳脂肪中分布，因此在分離過程中多數會選擇皂化處理，不但能夠促進維生素a與脂肪發生脫離，而且能夠將維生素a的酯轉變成視黃醇。曾有研究指出，在對樣品處理過程中可以采用脂肪酶處理，能夠對皂化處理予以替代，將酯轉化成視黃醇。④ 維生素a的萃取。現階段常用的萃取方法主要包括有：液液萃取、加壓溶劑萃取、固相萃取、超臨界流體萃取等。
1.2 色譜分離
高效液相色譜法具有分離和定量分析功能，為檢測乳制品中維生素a含量的一種常用手段，高效液相色譜分正相色譜和反相色譜兩種形式。
1.2.1 正相色譜
對于正相色譜而言其固定性為極性物質，常用的有硅膠或經極性基團改性的硅膠，而洗脫液則是采用非極性溶劑，譬如說正己烷等，在進行洗脫的過程中，也可在洗脫液中加入少量的極性調節溶液，譬如說異丙醇或者是氯仿等。研究證實正相色譜對流動相的變化具有較高的敏感性，因此采取梯度洗脫時耗時較長，此為正相色譜的不足之處，因此在乳制品檢測中比較少用。
1.2.2 反相色譜
反相色譜是利用在流動相與和極性洗脫液之間待分離物質的相分配實現的。一般情況下反相色譜的固定相為c18或c8，而洗脫液則是采取極性溶劑，譬如說水、甲醇、乙腈等，也可以是幾種溶劑的混合溶劑。大量實驗證實，反相色譜的穩定性較正相色譜高，因此在含量測定等方面的應用更加廣泛。現階段對于乳制品中維生素a的測定基本均采取反相色譜法。
1.3 檢測
在維生素a經過色譜柱進行分離后需要接受定量檢測，根據檢測物質的結構與性質，現階段較為常用的檢測器包括有紫外檢測儀、二極管陣列、用電化學法、熒光檢測儀、質譜檢測等。對于紫外檢測而言，由于維生素a中存在多個共軛體系，因此能夠對300nm-400nm范圍內的紫外光產生較強吸收，一般情況吸收波長在325nm左右，現階段在分析過程中紫外檢測器的應用最為廣泛，然近階段有研究顯示，二極管陣列的應用率正在逐漸增加，因其能夠更加準確的對檢測物質進行定性，并且可同時檢測多種物質。
1.4 定性與定量
現階段常用的定量法為內標法，其能夠有效提高準確度與精度，然在檢測維生素a時具有應用價值的內標物相對較少，所以一般較少應用，并且現階段市面上的維生素a的標準樣純度較高，并且色譜儀器的精密度也十分理想，因此外標法能夠對分析要求予以充分的滿足，在維生素a檢測中多數采取外標法進行定量。
2 存在的問題
由于經濟的發展，科技水平不斷提高，使得分析儀器以及分析方法不斷進行改進，近幾年分析水平得到了很大程度的提高，對乳制品中維生素a含量的檢測技術也已經日趨成熟。然而依舊存在一些需要進一步解決的問題，在諸多問題中，最為顯著的便是對維生素a的各種異構體進行檢測，盡管曾有相關的實驗嘗試對各種異構體的檢測進行合理解決，然而還不夠成熟。經分析研究得知，主要存在以下兩種障礙：對各種異構體的標準樣品比較缺乏；樣品中各種異構體純度不夠，并且會在短時間內發生相互轉化，穩定性較差含量測定無法得到準確結果。
結語
綜上所述，現階段對于乳制品中維生素a的檢測主要依賴高效液相色譜法，且多數采用反相色譜法，在檢測過程中應嚴格按照操作規程進行，做好樣品處理工作，對檢測器、流動相、固定相以及定量分析方法等進行合理的選擇，從而保證檢測結果的準確性。并應繼續展開維生素a異構體檢測的研究，使分析方法能夠得到完善，更好的為改善乳制品質量水平提供保障。
